磁珠法核酸提取：多≠好
核酸分離是目前分子生物學中日益重要的一項技術，在現代技術得到應用之前，核酸分離是一個基於多步提取以及離心的耗時耗力的過程，且常常由於受到分離產物產量小、純度低的限制，不適合自動化以及規模化。在過去幾年裡，有著特定功能的磁性微珠被開發出來，配合適當的緩衝液系統，可使其從粗細胞提取物中直接快速有效地純化出核酸，避免了離心步驟。此外，新方法提供了整個過程以及從更大的樣本容量中提取核酸的簡單自動化。
磁珠法提取核酸一般包括裂解、結合、洗滌、洗脫四個主要步驟。那麼吸附核酸的磁珠的功能是怎樣的。它為什麼能夠吸附核酸呢？
圖1 磁珠技術純化核酸原理圖
核酸提取系列微球均為矽羥基磁珠，該系列磁珠主要以超順磁鐵Fe3O4為核心，外表面修飾有SiO2層。並進行特殊的非特異性吸附處理，透過控制微球粒徑的大小，表面SiO2的厚度，以及矽羥基(-SiOH)密度，獲得擁有不同核酸富集效能的系列奈米材料，可以針對不同型別目標核酸選擇最合適的規格進行核酸提取、純化實驗。
磁珠法核酸提取過程中，有時候會出現核酸濃度偏低的情況，實驗人員可能會懷疑，是不是我樣品加的不夠多？是不是我的磁珠加得不夠多？但有時候恰恰可能是有些成分加的過多。
磁珠法提取核酸過程中的常見誤區
01.樣本量取得越多，提取效果越好
一般在樣本不夠新鮮或者樣本中核酸含量本身就不多的情況下，核酸提取效果不好，這時往往會採用多取樣本量來增加核酸提取量。但簡單地增加樣本量，往往會引入更多的雜質，超出裂解液的裂解能力，也會使得提取效率降低。所以並不推薦透過簡單的增加樣本取樣量的方式來達到增加提取量的目的。如果確實是由於樣本量不足而引起的提取量過低，建議在前處理先經過富集或者濃縮步驟再開始提取。或者增加裂解的完全性，使更多的核酸暴露出來也是一種解決方法。
02.試劑使用得越多，提取效果越好
裂解效果不好？多加點裂解液。洗滌效果不好？多加點洗滌液。這是大家在使用試劑盒時的慣性思維。但是對於磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞機率，而降低磁珠碰撞機率，會導致吸附率的大幅度下降。所以很多時候，雖然增加裂解液和洗滌液確實能夠起到增強裂解和增強洗滌的作用，但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率，無法保證磁珠碰撞效率是不能保證核酸提取效率的，所以單純增加試劑使用量改善提取效果並不一定完全有效。
03.磁珠使用得越多，提取效果越好
有很多實驗者喜歡在提取效果不佳的時候，增加磁珠的用量，認為磁珠多加一點，就能吸上更多的核酸，不得不說這種想法是不可取的。磁珠的主要特點是既可以分散於液體中，也可以在外加磁場作用下以固態方式和液相分離，任何試劑體系，磁珠和液體的比例都應該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因為無法均勻分散於液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多的雜質，對於除雜的效果影響非常大。甚至有些時候，過多的磁珠會吸附蛋白酶、溶菌酶等在液體體系中起主要作用的功能成分，導致整個試劑盒效率低下。有很多時候，在提取效果不佳的時候，減少磁珠使用量，反而是提升提取效果的最優途徑。
04.洗滌次數越多，提取效果越好
提取得到的核酸雜質過多時，實驗者會考慮多進行幾次洗滌，以得到更為純淨的核酸。增加洗滌次數確實有利於提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數控制在2~4次為宜。
05.和某種試劑盒對比效果不好，
就是磁珠不好
很多實驗人員在篩選磁珠過程中都是在已經成熟試劑體系下，簡單地等量替換磁珠，用於比較磁珠效果。這樣就會很容易得出某種磁珠效果不好的結論，但實際上，由於不同磁珠適合的體系和用量是不同的，往往需要調整過後才能獲得更好的提取效果。
