中國南通大學劉威等的最新研究利用大鼠脊髓損傷模型，系統分析了13種常用內參基因在脊髓損傷後不同時間點的表達穩定性，還探討了內參基因的穩定性對於目的基因表達的影響。該研究結果為大鼠脊髓損傷研究中內參基因的選擇提供了有價值的參考。
基因表達分析已成為神經損傷與修復研究領域的常用手段，為消除不同樣本在RNA產量、質量以及反轉錄效率上可能存在的差異，在基因表達分析研究中，通常會用表達穩定的內參基因對目的基因的表達量進行校正和標準化，以期獲得目的基因特異性表達的真實水平。目前脊髓損傷研究中對於內參基因的選擇，大多是基於文獻或者實驗者自身的經驗。但是脊髓損傷後內參基因的真實表達情況究竟如何，尚缺乏系統性的研究。大量研究表明，常用的內參基因在不同組織、細胞以及不同實驗條件下表達量並非持續穩定，甚至差別很大。因此盲目使用未經鑑定的內參基因，可能會得出錯誤的實驗結果。
劉威等此次實驗利用了脊髓半橫斷模型大鼠，系統評價了13個常用內參基因的表達穩定性，發現大鼠脊髓損傷後，在顯著的細胞及分子生物學變化背後，通常情況下認為穩定表達的內參基因，其表達水平亦發生了不同程度的改變。透過實時定量實時反轉錄聚合酶鏈反應結合生物學分析軟體geNorm及NormFinder進行評價，發現Ankrd27、Ubc以及Tbp在大鼠脊髓損傷後表達較為穩定，而Actb則是表達最不穩定的內參基因。進一步以Ankrd27、Ubc、Tbp以及Actb作為內參，探討穩定性不同的內參基因對目的基因表達水平的影響，結果顯示Ankrd27、Ubc與Tbp作內參，目的基因的表達水平與趨勢基本一致，而採用Actb作內參則得出不同的檢測結果。因此在脊髓損傷後的研究中建議使用Ankrd27、Ubc與Tbp作內參。
這項成果撰寫的文章發表在《中國神經再生研究（英文版）》雜誌2022年6期。
文章摘要：目前脊髓損傷實時反轉錄聚合酶鏈式反應研究中對於內參基因的選擇，大多是基於文獻或者實驗者自身的經驗。但是脊髓損傷後內參基因的真實表達情況究竟如何，尚缺乏系統性的研究。實驗利用了脊髓半橫斷模型大鼠，分析了18S，Actb，Ankrd27，CypA，Gapdh，Hprt，Mrpl10，Pgk1，Rictor，Tbp，Ubc，Ubxn11和 Ywhaz 共13種內參基因表達的穩定性。結果發現：（1）Ankrd27、Ubc以及Tbp在大鼠脊髓損傷後表達較為穩定，而Actb則是表達最不穩定的內參基因。（2）進一步以Ankrd27、Ubc、Tbp以及Actb作為內參，探討穩定性不同的內參基因對目的基因表達水平的影響，結果顯示Ankrd27、Ubc與Tbp作內參，目的基因的表達水平與趨勢基本一致，而採用Actb作內參則得出不同的檢測結果。（3）作者認為，在脊髓損傷後的實時反轉錄聚合酶鏈式反應研究中，建議使用Ankrd27、Ubc與Tbp作內參。實驗於2018年3月4日經江蘇省實驗動物倫理委員會批准（批准號20180304-008）。
文章關鍵詞：脊髓損傷；管家基因；內參基因；基因表達穩定性；標準化；定量實時反轉錄聚合酶鏈反應；geNorm分析；NormFinder分析
文章來源： Liu W, Yu J, Wang YF, Shan QQ, Wang YX (2022) Selection of suitable internal controls for gene expression normalization in rats with spinal cord injury. Neural Regen Res 17(6):1387-1392.
